Actividad De La Catalasa A Diferentes Temperaturas 1p2k1b

ACTIVIDAD DE LA CATALASA A DIFERENTES TEMPERATURAS. Objetivo Que el alumno observe el efecto de la temperatura en la actividad de la catalasa con el jugo de zanahoria. Marco teórico Existen dos factores que alteran o modifican la actividad enzimática: la temperatura y el pH. La velocidad de las reacciones enzimáticas aumenta por lo general con la temperatura, dentro de un intervalo en que la enzima es estable y activa. La velocidad por lo general se duplica por cada 10 C° de aumento de temperatura. Sin embargo las enzimas se desnaturalizan cuando la elevación de la temperatura sobrepasa cierta temperatura límite. La cual a su vez es la temperatura óptima de trabajo. A bajas temperaturas, las reacciones disminuyen mucho o se detienen, pero la acción catalítica reaparece cuando la temperatura se eleva a valores normales. La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales. La función de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada). Fue una de las primeras enzimas purificadas y ha sido muy estudiada. Es una de las enzimas más eficientes con una velocidad de aproximadamente 200,000transformaciones/segundo/subunidad. La proteína es un tetrámero formado por cuatro subunidades idénticas. Cada monómero contiene un grupo prostético Hemo en el centro activo. En algunas especies también contiene una molécula de NADP por subunidad cuya función es proteger a la enzima de la oxidación por su sustrato H2O2. La catalasa trabaja facilitando la descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. La eficacia de la catalasa para la degradación del peróxido de hidrógeno depende de varios factores: La dosis de la catalasa a usar. La concentración inicial del Peróxido de hidrógeno. El tiempo de o en la disposición del proceso.

Material

Gradilla 8 tubos de ensaye

Mechero bunsen

Pipeta Graduada

Pizeta

5ml

Termómetro

Perilla de succión

Rejilla de asbesto Soporte universal

Pinzas para tubo de ensaye

Vaso de pp. De 250 ml

Reactivos •

Peróxido de hidrogeno (H2O2)

• Jugo de zanahoria

Procedimiento 1. Se lavo todo el material perfectamente. 2. Se preparo la solución de peróxido de hidrogeno a 50:50 (esto es

50ml de agua destilada y 50ml de peróxido de sodio). 3. Se rotularon los 8 tubos de ensaye para diferenciarlos 4. En cuatro tubos de ensaye se introdujo 1 cm de jugo de zanahoria. 5. En otros cuatro tubos de ensaye se añadió 1ml de peróxido de

hidrogeno. 6. Cada tubo de peróxido de hidrogeno se mantuvieron a diferentes

temperaturas así el tubo 1 a 0 grados centígrado, el 2 a 23 grados centígrados, el 3 a 37 grados centígrados y el tubo 4 a 65 grados centígrados (durante 5 minutos), con la finalidad de que el sustrato (peróxido de hidrogeno) tomara la temperatura. 7. Después del tiempo transcurrido a cada tubo de ensaye con el

jugo de zanahoria se le agrega el peróxido de hidrogeno, antes se marco con un plumón el cm de catalasa en cada tubo para así cuando reaccione con el peróxido de hidrogeno (al añadirlo se deja 1 min de reposo se marca hasta donde subió la espuma del jugo para que también se calcularan los cm de la medida inicial a la medida final).

8. Se realizo un segundo ensayo con la finalidad de comprobar la

repetitividad de datos.

Resultados

Tabla #1.- Valores obtenidos en cada ensayo a diferentes temperaturas. TEMP. (° TIEMPO(s C) eg) 0 60 23 60 37 60 65 60

ensayo 1 DISTANCIA VEL. (cm) (cm/seg) 1.2 0.02 1.3 0.02 2.5 0.04 2.5 0.04

TIEMPO(s eg) 60 60 60 60

ensayo 2 DISTANCIA (cm) 0.8 1.2 2.4 2.6

VEL. (cm/seg) 0.01 0.02 0.04 0.04

Grafica #1.- Grafica de actividad enzimática a diferentes temperaturas.

Reacción que se lleva a cabo:

CnH2On + H2O2

H2O + O2

Analisis de resultados Con base a la tabla #1 y a su grafica respectiva podemos observar como interactua la enzima catalasa presente en las celulas de la zanahoria cuando se encuentra en o con su sustrato el peroxido de hidrogeno, se realiza una reacción de oxido-reducción donde el peroxido se transforma en oxigeno y en agua, y que la temperatura optima es poco precisa debido a que no se observa la desnaturalizacion de la enzima con los valores de temperatura elegidos, por otra parte si se puede decir que la velocidad de reaccion a 0°C es muy lenta. En la bibliografia consultada se tiene que las condiciones optimas son:

temperatura entre 30-40 ºC, pH entre 4-7, preferentemente entre 5-5.5 la temperatura de desnaturalizacion se encuentra entre los 60-70 °C. Por lo que podemos suponer que la temperatura a la que se desnaturaliza la enzima esta entre los 66-70°C.

Conclusión La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de hidrógeno en oxígeno molecular y agua. Se encuentra en las células animales y vegetales asi como en la sangre. Descompone a H2O2 produciendo agua (H2O) líquida y oxígeno (O2) gaseoso. Las burbujas (O2 gaseoso) son una señal de que está ocurriendo una reacción. El calor puede cambiar la conformación de la Enzima y alterar el sitio activo, afectando la actividad enzimática negativamente. Muchas enzimas exhiben una temperatura óptima en donde su actividad es máxima por lo que podemos determinar que .

Bibliografía Murray, Mayes,Rodwell. “Bioquimica de Harper”. Manual Moderno .14 Edición. Lenhninger “ Principio de Bioquimica” McGraw Hill. 4 Edición A. WISEMAN “MANUAL DE BIOTECNOLOGÍA DE LOS ENZIMAS” EDITORIAL ACRIBIA, S.A. INDUSTRIAL ENZYMOLOGY (SECOND EDITION), EDITED BY GODFREY & WEST, STOCKTON PRESS http://www.biochem.ucl.ac.uk/bsm/pdbsum/ http://www.mty.itesm.mx/die/ddre/transferencia/Transferencia41/biotec. htm http://perso.wanadoo.es/sanchez.priebe/articulo.htm http://www.textileindustries.com/News.htm?CD=267&ID=2146